Обов’язковий контроль безпечності харчових продуктів: коагулазопозитивні стафілококи

Законодавча база

Методи виявлення та підрахунку коагулазопозитивних стафілококів в харчових продуктах прописані в Наказі №548  «Про затвердження Мікробіологічних критеріїв для встановлення показників безпечності харчових продуктів». В наказ внесено два методи підрахунку, які позначено як референсні.

Також ці методи мають використовуватися в арбітражних дослідженнях всіх харчових продуктів згідно Наказу №397 «Про затвердження Переліку референс-методик відбору зразків та їх досліджень (випробувань), що повинні застосовуватись в арбітражних дослідженнях об’єктів санітарних заходів». 

Назви методів

  • ISO 6888-1:1999 Microbiology of food and animal feeding stuffs - Horizontal method for the enumeration of coagulase-positive staphylococci (Staphylococcus aureus and other species) - Part 1: Technique using Baird-Parker agar medium 
  • Мікробіологія харчових продуктів і кормів для тварин. Горизонтальний метод підрахування коагулазопозитивних стафілококів (Staphylococcus aureus та інших видів). Частина 1. Метод з використанням агарового середовища Беард-Паркера.
  • ISO 6888-2:1999 Microbiology of food and animal feeding stuffs - Horizontal method for the enumeration of coagulase-positive staphylococci (Staphylococcus aureus and other species) - Part 2: Technique using rabbit plasma fibrinogen agar medium 
  • Мікробіологія харчових продуктів і кормів для тварин. Горизонтальний метод підрахування коагулазопозитивних стафілококів (Staphylococcus aureus та інших видів). Частина 2. Метод з використанням фібриногену плазми крові кролика для агарового середовища.

Визначення поняття «коагулазопозитивні стафілококи» згідно ISO 6888-1:1999

Грампозитивні, каталазопозитивні мікроорганізми, які утворюють типові і / або атипові колонії на (в) селективно-діагностичному живильному середовищі, що дають позитивну реакцію на коагулазну або специфічну для кролячої плазми реакцію на агарі з кролячої плазмою і фібриногеном.

Значення для санконтролю

Стафілокок має велике значення для санітарного контролю харчового виробництва через його поширення на шкірі та на слизових верхніх дихальних шляхів людини. Тобто він є індикаторним мікроорганізмом для визначення наявності більш вірулентних і патогенних бактерій, що передаються контактно-побутовим та аерозольним шляхом. Також він виробляє ентеротоксин, що є ключовою причиною харчових отруєнь. Знаходять його найчастіше в сирому молоці й у харчових продуктах, виготовлених вручну. 

Де шукати?

  • Сири, вироблені з сирого молока.
  • Сири, вироблені з молока, яке піддавалося термічній обробці при температурі, нижчій за температуру пастеризації, та дозрілі сири, вироблені з молока або сироватки, які пройшли пастеризацію або термічну обробку з вищою температурою.
  • Недозрілі м’які сири (свіжі сири), виготовлені з молока або сироватки, які пройшли пастеризацію або термічну обробку при вищій температурі.
  • Сухе молоко та суха сироватка.
  • Продукція з ракоподібних та молюсків, що пройшли термічну обробку, без раковин, панцира та із знятими стулками.

Виявлення коагулазопозитивних стафілококів згідно ISO 6888-1:1999

Згідно цього методу проводиться облік характерних колоній, що розвинулися за 24-48 год при 35-37°С на агарі Байрд-Паркера, з наступним підтвердженням реакції  коагулази.  

Схема посіву та підрахунку

1. Посів на агар Байрд-Паркера (до агару необхідно додати Емульсію яєчного жовтка з телуритом):

  • Внести на поверхню 2 чашок Петрі по 0,1 мл зразка чи первинного розведення, повторити з наступними десятикратними розведеннями.
  • Якщо для деяких продуктів, потрібно підраховувати низькі кількості коагулазопозитивних стафілококів, виявлення може бути піднято в 10 разів шляхом інокуляції 1,0 мл випробуваного зразка, якщо він рідкий, або 1,0 мл первинного розведення для твердих продуктів шляхом посіву на поверхню однієї великої чашки з агаром (140 мм) або на поверхні трьох маленьких (90 мм). В обох випадках готують повтор за допомогою двох великих чашок або шести маленьких.
  • Інкубувати при 35 чи 37°С 24±2год з повторною інкубацією ще 24±2год.

2. Відбір та облік колоній.

Характерні колонії на агарі Байрд-Паркера чорні або сірі, блискучі й опуклі (від 1 мм до 1,5 мм в діаметрі, після інкубації протягом 24 год і від 1,5 мм до 2,5 мм в діаметрі після інкубації протягом 48 годин), оточені чіткої зоною, яка може бути частково непрозорою. Після інкубації протягом не менше 24 год може з'явитися опалесцююче кільце в цій вільній зоні  безпосередньо в контакті з колоніями Підрахувати типові колонії на агарі Байрд-Паркера.

  • Відібрати 5 типових колоній (якщо типових колоній менше 5 – відібрати всі, якщо типових колоній немає, відібрати атипові, якщо присутні типові й атипові, відібрати по 5 колоній всіх типів.)

3.  Підтвердження (коагулазний тест).

  • Посіяти кожну з відібраних колоній в пробірки  з бульйоном з серцево-мозковим екстрактом.
  • Інкубувати при 35 чи 37°С 24±2 год.
  • Асептично внести 0,1 мл кожної культури в стерильні пробірки з 0,3 мл кролячої плазми.
  • Інкубувати при 35 чи 37 °C.
  • Оцінити реакцію плазми. Досліджувати згортання плазми потрібно при нахилі пробірки в інтервалі від  4-х до 6 год інкубації і, якщо тест негативний, перевірити ще раз через 24 год інкубації або досліджувати на час інкубації, заданим виробником. Вважаємо тест на коагулазу  позитивним, якщо обсяг згустку займає більше половини початкового об'єму рідини.

Негативний контроль

Негативним контролем для кожної партії плазми слугує 0,1 мл стерильного бульйону з серцево-мозковим екстрактом, що додається до відповідного об’єму плазми та інкубується без інокуляції. В контролі плазми не повинно бути жодних ознак згортання.

Визначення коагулазопозитивних стафілококів згідно ISO 6888-2:1999

У цьому методі також використовується агар Байрд-Паркера. Але до нього додається фібриноген кролячої плазми, що дає можливість одразу на чашці оцінити коагулазну активність колоній. Вона проявляється так само, як і протеазна та ліпазна активність – зоною преципітації при додаванні яєчної емульсії.

Сподіваємося, зі статті Ви отримали вичерпну інформацію щодо референсних методів виявлення коагулазопозитивних стафілококів. Для впровадження методики користуйтесь безпосередньо стандартом.

Анна Журба,

спеціаліст відділу витратних матеріалів 

ТОВ «ХІМЛАБОРРЕАКТИВ»

Добавить комментарии: